1、材料与方法
1.1精液采集 假阴道法常规采精，要求精液颜色、气味正常，PH值6.4—6.8，密度每毫升15亿以上，活力0.75以上。采得的精液根据密度、活力按1∶2—5的比例稀释。
1.2稀释液 A方：乳糖6克、柠檬酸钠1.5克、蒸馏水100毫升。B方：乳糖3.8克、葡萄糖2.6克、柠檬酸钠1.3克、蒸馏水100毫升。C方：乳糖4.6克、葡萄糖3.1克、柠檬酸钠1.5克、蒸馏水100毫升。取A方、B方液各80毫升，C方液105毫升，分别加入卵黄20毫升，甘油5毫升，青、链霉素各10万单位。
1.3平衡 在冰箱下层温度1-4℃的条件下,将稀释后经封闭的精液置入进行平衡。
1.4冻精颗粒的制作 采用铝盒氟板制冻法，将氟板浸入盛有液氮的铝盒内，待沸腾停止后，将氟板取出置于液氮上方2—3厘米，即可滴冻，剂量为每颗粒0.1毫升。
1.5解冻 采用水浴快速解冻，将含有1.8—2.9%柠檬酸钠解冻液0.5毫升置入试管内在45至60℃的温水中浴热1分钟，将冷水颗粒投入试管内，经摇动溶化至2/3时取出，轻摇至全部溶化。
1.6输精 采用阴道输精和子宫颈口输精两种方法。
2、试验结果
2.1稀释液的筛选
用三种不同稀释液进行冷冻效果比较试验，从解冻后活率及复苏率两个指标来看，以C方效果最好，多次重复解冻活率均在45%以上。与A 方、B方比较，差异极显著（P<0.01），结果见表1。
表1 不同稀释液冷冻效果比较 (单位：%)
| 配方代号 | 重复次数 | 原精活率 | 冻前活率 | 解冻活率 | 复苏率 |
| A方 | 8 | 83 | 65 | 22 | 29.73 |
| B方 | 15 | 81.8 | 71.7 | 27 | 35.34 |
| C方 | 24 | 82.4 | 78.6 | 49.7 | 61.97 |
2.2冷冻技术试验
2.2.1不同平衡时间对冷冻效果的影响 在利用尿素进行降温平衡的特定条件下，15分钟、30分钟、1小时、1.5小时、2小时、3小时6种平衡时间的精子复苏率分别为46.67%、52.63%、64.52%、60%、60.8%和55.17%，以平衡1小时的解冻活率最高，15分钟、30分钟最低。随着平衡时间的逐渐延长，解冻活率有逐渐延长，解冻活率逐渐下降的趋势。
2.2.2氟板与液面距离对冷冻效果的影响 在氟板距液氮面1、2、3、4厘米的条件下，取原精活力0.75，平衡后活力0.7时精液分别进行冷冻，重复观察15次，冻后活力分别为0.4、0.55、0.45、0.4，以氟板距液氮面2厘米冷冻效果最好，精子复苏率达75.86%，分别比1厘米、3厘米、4厘米高20.69%、13.79%、20.69%，但统计学分析，差异不显著（P>0.05）。
2.2.3不同水温对冻精解冻活率的影响 分别利用35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃8个不同梯度的水温对冷冻颗粒进行解冻，结果45—60℃的水温取得精子复苏率74.6%的解冻效果，与35℃的解冻效果比较，差异极显著（P<0.01），与65℃解冻效果比较差异不显著（P>0.05），与70℃解冻效果比较差异显著（P<0.05），说明水温偏低或偏高对精子的复苏都不利。
2.2.4不同浓度解冻液对解冻后精液存活指数的影响 在30℃的温度条件下保存解冻后活力0.5以上的精液，结果含有1.3%、2.2%、2.9%柠檬酸钠解冻液的存活指数分别为2.8、3.6、3.2，以含2.2%，柠檬酸钠解冻液的存活指数最高。
3、受胎效果试验
选用C配方稀释液制作冷冻精液颗粒，对母羊进行受胎效果试验，并把输入鲜精和自然交配作为对照组，结果第一情期受胎率冻精组为71.21%，鲜精组为75.24%，自然交配组为75.56%，冻精组的受胎率分别比鲜精组和自然交配组低4.03%和4.35%，但组间差异不显著（P>0.05），结果见表2。
表2 :冷冻精液受胎效果及比较 （单位：只、%）
| 组别 | 试验种类 | 颗粒种类 | 配种羊数 | 调查羊数 | 受胎羊数 | 受胎率 | 产羔母羊数 | 产羔数 | 产羔率 | |
| 试 验 组 |
冷冻精液 | 初试 | 波尔山羊 | 88 | 78 | 54 | 69.23 | 48 | 103 | 214.58 |
| 本地山羊 | 46 | 44 | 30 | 68.18 | 25 | 54 | 216.00 | |||
| 中试 | 波尔山羊 | 2210 | 1100 | 786 | 71.45 | 750 | 1637 | 218.27 | ||
| 本地山羊 | 1860 | 900 | 641 | 71.22 | 630 | 1300 | 206.35 | |||
| 小计 | 4204 | 2122 | 1511 | 71.21 | 1453 | 3094 | 212.94 | |||
| 对照组 | 鲜精 | 本地山羊 | 450 | 315 | 237 | 75.24 | 231 | 486 | 205.06 | |
| 自交 | 本地山羊 | 34 | 34 | 75.56 | 34 | 74 | 211.43 | |||
3.1母羊年龄、胎次对受胎效果的影响 因母羊的年龄与胎次呈强正相关，所以年龄与胎次的影响是基本一致的。将母羊按1岁以下，1—2岁、2—3岁、3岁以上分成4组，其冷冻精液配种第一情期受胎率分别为63.04%（46/29）、76.89%（212/163）、71.08%（83/59）和63.79%（58/37）。将母羊按处女1—3胎、4—6胎、6胎以上分成4组，受胎率分别为62.69%（67/42）、74.38%（160/119）、72.11%（147/106）和68.00%（25/17），以1—2岁，1—3胎受胎率最高， 2—3岁，4—6岁胎次之，但统计分析，各组组间差异不显著（P>0.05）。
3.2不同输精方法对受胎效果的影响 统计子宫颈口输精259只母羊，结果有204只受胎，受胎率78.76%，比阴道输精的60%（140/84）高18.76%，二者比较，差异极显著（P<0.01）。
3.3不同颗粒数对受胎效果的影响 对38只母羊进行2颗粒子宫颈口输精，结果有30只受胎，受胎率78.95%，另59只母羊进行1颗粒子宫颈口输精，结果有41只受胎，受胎率69.49%，前者比后者高9.46%（P>0.05）。
4、讨论与分析
4.1 我们根据波尔山羊鲜精按1∶50比例稀释，每羊输入0.5毫升能够保持较高受胎率的结果，冻精颗粒一律用0.5毫升解冻液进行再稀释，使母羊输入的有效精子数在0.2亿左右（1颗粒）。仍取得了69.49%的受胎率，但比输入0.4亿（2颗粒）的受胎率降低了9.46（P>0.05）,这与鲜精类似，试验取得的结果是一致的。因此建议波尔山羊冻精颗粒内的有效精子数以0.3—0.4亿为宜。
4.2 在波尔山羊冻精颗粒的制作过程中，要保证平衡后精液的温度不得回升，否则往往影响冻精颗粒的解冻活率。
4.3 处女羊由于个体较小，使用开腔器困难，而采用阴道输精法又影响受胎效果，有待进一步探讨。
